1　试剂

1.1　2mol　/L　盐酸羟胺，冷处保存。

1.23.5mol　/L　氢氧化钠。

1.3　4mol　/L　盐酸

浓盐酸（比重1.18）1份，加2份蒸馏水稀释。

1.40.37mol　/L　三氯化铁（FeCl3·6H2O），溶解于0.1mol　/L　盐酸内。

1.50.001mol　/L　醋酸钠（pH4.5）。

1.62.5mmol　/L　的氯化乙酰胆碱液

精确称取已干燥至恒重的氯化乙酰胆碱22.7mg，用0.001mol　/L　醋酸钠液（pH4.5）溶解，移入50ml容量瓶中，用0.001mol　/L　醋酸钠液稀释至刻度。

2　操作

2.1　样品

精确量取样品1ml（含O-乙酰基0.5～2.5μmol）置于试管中，加2ml新鲜配制的碱性羟胺液（等体积的2mol　/L　盐酸羟胺与3.5mol　/L　氢氢化钠混合，3小时内可用），摇匀，于室温放置4分钟，加1ml　4mol　/L　盐酸，使pH为1.2±0.2，摇匀，加1ml　0.37mol　/L　三氯化铁，摇匀，于540nm比色，同时作一样品空白，取样品1ml于试管中，先加1ml　4mol　/L　盐酸，后加2ml碱性羟胺（即加酸与加碱性羟胺的次序颠倒），加三氯化铁等操作同上。

2.2　标准曲线

精确量取氯化乙酰胆碱（或溴化乙酰胆碱）标准液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于试管中，加蒸馏水补至1ml，其余操作同样品，同时作标准空白，即作与上相同的系列标准管，只是加酸与加碱性羟胺的次序颠倒，其他操作均同。

3　计算

标准管比色读数分别减去各自空白比色读数，然后画出标准曲线。样品比色读数减去其空白读数，再从标准曲线查出品相当标准液之ml数A。

样品O-乙酰基含量（mmol　/L）=A×2.5

附注

也可采用WHO规程法，但应相应提高样品用量。