严格来说，LAK细胞并非是一个独立的淋巴群或亚群，而是NK细胞或T细胞体外培养时，在高剂量IL-2等细胞因子诱导下成为能够杀伤NK不敏感肿瘤细胞的杀伤细胞，称为淋巴因子激活的杀伤细胞（lymphokine activated killer cells,LAK）。目前应用LAK细胞过继免疫疗法（adoptiveimmunotherapy）与直接注射IL-2等细胞因子联合治疗某些肿瘤，已获得一定的疗效。

一、LAK　细胞

1.LAK的发现　1982年Grimm等首先报道外周血单个核细胞（PBMC）中加入IL-2体外培养4-6天，能诱导出一种非特异笥的杀伤细胞，这类细胞可以杀伤多种对CTL、NK不敏感的肿瘤细胞。目前尚未发现LAK细胞特有的表面标志，许多实验表明，LAK细胞的前体细胞是NK细胞和T细胞。

2.LAK的临床应用　1984年11月Rosenberg研究组经美国食品和药品检验局（Us Food and Drug Administration,FDA）批准下，首次应用IL-2与LAK协同治疗25例肾细胞癌、黑素瘤、肺癌、结肠癌等肿瘤患者。治疗用LAK细胞数量在0.6-18.4*10¹⁰，IL-2用量2.8*10⁵-3.32*10⁶U/kg。其中11例肿瘤缩小超过50%，1例黑素瘤完全消退。1988年该研究组总结了IL-2与LAK细胞协同治疗222例肿瘤患者，其中16便患者肿瘤转移灶完全消退，26例患者肿瘤消退50%以上，该疗法对转移性肾细胞癌、黑素瘤、结肠癌和非何杰金氏淋巴瘤患者的疗效较显著。有报道乳腺癌、膀胱癌局部应用IL-2进行治疗也获得明显疗效。

由于IL-2用量大，在治疗过程中可出现毒副反应，最常见和最严重的毒副作用是出现毛细血管渗漏综合征（capillary leak syndrome,CLS），主要表现为全身性水肿和多器官功能失调，可引起胸腹腔积液、肺间质水肿和充血性心力衰竭。引地卢CLS的机理可能与内皮细胞损伤和产生血管活性物质有关。

二、肿瘤浸润淋巴细胞

1986年Rosenberg研究组首先报道了肿瘤浸润淋巴细胞（tumorinfiltrating lymphocyte,TIL）。TIL细胞表型具有异质性，一般来说，TIL中绝大多数细胞CD3阳性。不同肿瘤来源的TIL细胞中，CD4+T细胞、CD8+T细胞的比例有差异，大多数情况下以CD8+T细胞为主。新鲜分离的TIL中CD25+细胞百分率较低，随着体外加IL-2培养时间的延长，CD25+细胞百分率逐渐升高。NK细胞的标记（CD16，CD56）在TIL体外加IL-2培养过程中有先增高后降低的趋势。

用机械处理和酶消化方法，从肿瘤局部分离出肿瘤浸润的淋巴细胞，加入高剂量IL-2体外培养，残存的肿瘤细胞7-13天全部死亡。经IL-2活化的TIL与来自PBMC的LAK细胞比较，其特点是：（1）50-100倍，因此在治疗中可以减少效应细胞和IL-2的用量，而且对LAK治疗无效的晚期肿瘤仍有一定治疗效果；（2）主要由CD8阳性细胞诱导而来，在动物实验中发现TIL杀伤肿瘤作用具有特异性；（3）宿主的抑制状态有利于TIL的杀伤作用，因此治疗时加用环磷酰胺（Cy）100mg/kg可明显提高疗效，可能与免疫抑制药能消除抑制性细胞或因子，增强过继免疫治疗作用有关，因而可减少IL-2的用量，降低毒副反应；（4）可从手术切下肿瘤组织、肿瘤引流淋巴结、癌性胸腹水中获得淋巴细胞，经加IL-2培养后，其生长、扩增能力强于LAK细胞。已有报道应用TIL治疗14例转移性肺癌等晚期肿患者，其中4例肿瘤缩小50%以上，副作用明显低于IL-2/LAK疗法。

应用LAK或TIL细胞治疗肿瘤国内外进展都很快，今后发展的方向是：（1）提高LAK细胞的纯度，应用活化LAK细胞贴壁的特性，纯化粘附LAK（adherent-LAK,A-LAK）细胞。在IL-2诱导下数量可增加100倍，而且抗肿瘤转移的作用比LAK强20-50倍。（2）改变继承转移细胞在体内的分布，如改变注射细胞途径和方法，达到局部/区域继承免疫疗法的目的。（3）与其它细胞因子如IL-12、IFN、TNF-α和CSF联合治疗，增强LAK的杀伤活性，另有报道，抗CD3单抗与IL-2协同，能显著提高LAK细胞的数量和杀伤活性。应用CD3单抗诱导的杀伤细胞称为CD3抗体激活的杀伤细胞（CD3McAb activated killer cells,CD3AK），抗体含量在10-20ng/ml即可达到刺激杀伤活性的高峰，体外培养数天后即可出现明显的杀伤活性。CD3AK激活需要单核细胞存在，其增殖速度和细胞毒活性均高于LAK。所有的D3+CD8+T细胞和1-6%CD3+CD4+T细胞可诱导出CD3AK。CD3AK已开支应用于临床。（4）将某些细胞因子（如IL-2、TNF等）cDNA转染LAK或TIL用于基因治疗。

表7-14 影响LAK效应的因素及机理

影响因素调节方式效　应促进作用抑制作用细胞单核-巨噬细胞双向T、NK产生IL-2，表达高亲和性IL-2r产生PGE2，抑制IL-2产生，消炎痛（indomethacin）可解除Mφ抑制作用肿瘤细胞双向肿瘤细胞及其提取物增强混合淋巴细胞肿瘤细胞培养和体外致敏的LAK活性肿瘤细胞分泌的因子抑制LAK活性中性粒细胞负　产生超氧化阴离子（O2-）红细胞正分泌超氧化物歧化酶，抑制O2-作用，促进淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ和表达IL-2R　细胞因子IL-1正IL-2、IFN-γ产生和IL-2R表达，增强LAK的ADCC效应　IL-3正+　IL-4双向+，多为小鼠实验系统-，抑制IL-2诱导的LAK活性IL-5正协同IL-2诱导LAK活性　IL-6正协同IL-2诱导LAK活性　IL-7正单独可诱导LAK活性　IL-12正协同IL-2诱导LAK活性　GM-CSF正促进Mφ分泌IL-1、TNF-α　TNF-α正与IL-2有协同作用，LAK分泌　　　TNF-α直接作用　IFN-γ双向促进LAK分化可通过单核-巨噬细胞分泌PGE2抑制LAK活性IFN-β负抑制细胞因子产生和受体抑制细胞因子产生和受体表达LR正促进LAK杀伤活性　抗体抗肿瘤细胞正促进LAK的ADCC　抗CD3正与IL-2联合应用，促进LAK活性，增加LAK数量　抗Tac，抗TfR负　封闭细胞表面结构抗IFA-1负　抑制效应细胞-靶细胞粘附抗LAK-1负　　双特异性抗体正抗肿瘤和CD3McAb重构的双特异性抗体　多糖激素神经肽蘑菇多糖、黄芪正　　去甲肾上腺素正激活PKC　生长抑素正抑制腺苷酸环化酶　糖皮质激素负　-PGE2负　　β-内啡肽负　　环孢菌素A负　-

表7-15 生药活性多糖对细胞因子产生、淋巴细胞功能和抗肿瘤的增强作用

名称调节作用应用范围香菇多糖（Lentinan）促进IL-1、IL-2产生免疫增强剂抗肿瘤提高Th功能　促进T细胞分化和CTL杀伤活性　协同IL-2激活的LAK杀伤活性　协同IL-2激活的LAK杀伤活性　枸杞子多糖（Kycium　Bsrbarum polysaccharide,LBS）促进IL-2分泌调节免疫功能　抗衰老抗肿瘤（动物实验）刺五加多糖（polysaccharide　of Acanthopanax Senlicosus,PAS）促进淋巴细胞对丝裂原的抗癌、抗白血病增殖反应协同ConA诱导淋巴细胞分泌IL-2诱生IFN促进CTL活性（动物实验）黄芪多糖（Astragalus　polysaccharide,APS）促进淋巴细胞增殖治疗化疗引起增强Th功能的免疫抑制增强病毒诱生IFN　促进IL-1、IL-2产生　F3成份增强LAK活性