在建立某一ELISA测定中，应对包被抗原或抗体的浓度和酶标抗原或抗体的浓度予以选择，以达到最合适的测定条件和节省测定费用。下面以间接法测抗体和夹心法测抗原为例，介绍最适工作浓度的选择方法。

（一）间接法测抗体

1．酶标抗抗体工作浓度的选择

（1）用100ng/ml人IgG进行包被，洗涤。

（2）将酶标抗人IgG用稀释液作一系列稀释后分别加入已包被的孔中，保温、洗涤。

（3）加底物显色。加酸终止反应后，读取吸亮度（A），绘制曲线如图15-10。读取A值在1.0时的酶标抗体稀释度，作为酶标抗体的工作浓度。该酶标抗人IgG的工作浓度应为1/1600。

2．棋盘滴定法选择包被抗原工作浓度

（1）用包被液将抗原作一系列稀释后进行包被，洗涤。

（2）将强阳性参考血清、弱阳性参考血清和阴性参考血清用稀释液作1:100稀释，加样，保温，洗涤。

（3）加按工作浓度稀释的酶标抗人IgG抗体，保温，洗涤。

（4）加底物显色。加酸终止反应后读取A值。

（5）选择强阳性参考血清的A值为0.8左右、阴性参考血清的A值小于0.1的包被抗的的稀释度作为工作浓度。表15-1为本例的测定结果，表中数字为A值。从表中可见1:200为最舒适的工作浓度。

表15-1 间接ELISA法包被抗原工作浓度的选择