中医书籍-->西医备考-->实用免疫细胞与核酸-->第五章 免疫金银及铁标记技术-->第五节 胶体金标记物的制备-->五、胶体金标记蛋白质的纯化-->(二)凝胶过滤法

(二)凝胶过滤法

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(1)将标记的大于10nm的胶体金溶液选用15000r/min 4℃离心15min,吸出上清,弃去沉淀,以去除大的聚合物。

(2)一般在10nm以上所标记的胶体金均可在调整离心机上离心,小于10nm颗粒的胶体金用超速离心机离心,在4℃离心1h左右,弃上清,将沉淀以原体积的0.02mol./l TBSpH8.2(内含1%BSA,0.05%叠氮钠)溶解,重复离心2~3次,沉淀溶于原体积的1/10TBS中。4℃保存备用。为了得到颗粒均匀一致的免疫金试剂,上述粗提制剂可用10%~30%蔗糖或甘油溶液作密度梯度离心,分带收集不同大小颗粒的胶体金标记蛋白制剂。

几种免疫金探针离心所用转速(见表5-6),离心纯化时所用转速见表5-7,胶体金的OD值见表5-8。

表5-6 几种免疫金探针离心时所用转速参考表

说明:GAR IgG=羊抗兔IgG;RAm IgG=兔抗鼠IgG;ALcc IgG=抗肝细胞癌IgG; SPA=葡萄球菌A蛋白

表5-7 几种免疫金探针离心纯化时所用转速

将纯化好的胶体金用0.02mol/l TBS缓冲液作1:20稀释,用520nm测OD值。

表5-8 不同大小胶体金的OD值

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