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二、SPA的应用
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自70年代开始,国外应用SPA建立了许多敏感、特异性强、快速和简易的实验方法,并在许多方面的应用中积累了实际应用的材料,现已广泛应用到免疫学及其相关科学如细胞学、细菌学和病毒学等。其可能应用的范围可归纳为以下四个方面:
1.应用于免疫球蛋白的制备和分析 SPA是一种比较理想的提纯和分析免疫球蛋白的试剂。由于SPA与IgG及其某些亚型的Fc段有较强的结合力,可利用来提纯、分析免疫球蛋白制剂,结合后的PSA—IgG可再用解离剂如4mol/L尿素、4mol/L,硫氰酸盐或6mol/L的鸟嘌呤盐酸盐使之解离,多用SPA—Sepharose 层析柱分离IgG或其亚型及断片如Fc、Fab等。
2.应用于免疫细胞化学 由于SPA具有双价结合力,在免疫细胞化学技术中可作为桥抗体或标记抗体。由于SPA能与多种动物的IgG的Fc段结合,因此,作为第二抗体或标记抗体,SPA的最大优点是不受种属特异性的限制,故在目前各种免疫细胞化学技术中已得到广泛的应用。除不受种属限制这一特点外,SPA法还具有染色时间短、灵敏性高和背景染色淡等优点。据报告用国产酶联SPA代替酶标记抗体,应用间接染色,时间较PAP法省时一半。SPA分子量小(13000~42000),易于穿透组织,而免疫球蛋白酶标记抗体为200000,PAP复合物为430000,均较SPA分子量大。
3.应用于多种细菌、支原体和病毒等病原体的简易快速诊断可应用SPA菌体作为载体,结合特异性抗体成为一种吸附原,作协同凝集剂,用于某些细菌和病毒的定群和分型(详见第二章 第三节 )。
4.可作为一种研究免疫复合物、膜抗原、膜受体和膜Ig的固相吸附剂 Hallgsen用同位素标记SPA测定血IgG的凝集物,发现85%全身性红斑狼疮和42%类风湿病人血清中凝集物增高。SPA用于细胞膜抗原、表面IgG和Fc受体的研究最大特点是能研究活细菌。Ghetie(1976)用SPA致敏绵羊红血球,与经IgG处理的细胞形成玫瑰花环,来鉴定带Fc受体的细胞,反之,如用SPA抑制玫瑰花环形成,则可定量测定细胞表面的IgG。应用SPA与胶体金或铁蛋白相结合,可在电镜水平检查抗原抗体反应的定位。特别是蛋白A—胶体金技术(Protein A—Gold technique, PGA技术)自Pomano和Romano(1977)首次报告用于标记细胞表面抗原、包括淋巴细胞、血小板、大鼠肾脏细胞及感染的病毒细胞获得成功以后,已得到愈来愈广泛的应用(详见第七章 ),是一种较为理想的免疫电镜技术。
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