（1）超薄切片厚50～70nm左右，载于200～300网孔的镍网上。

（2）置1%H2O2内10min至1h（视树脂的硬度和切片的厚度而定），以去锇酸和增进树脂穿透性，有利抗体进入。如切片很薄或于低温包埋时，此步可省略。操作时，滴入1%H2O2液1滴于蜡板上，将网的载片面轻浮于液滴上。对中枢神经系统切片，有主张以1%过碘酸钾（KIO4）代替H2O2的。

（3）双蒸水洗3次，每次10min，第1，2次洗法如（2），浮于液滴上，第3次以盛双蒸水的注射器沿镍网面冲洗，水流应有适当压力，但不宜过高强，用滤纸在网缘将水吸干。

（4）浮于正常羊血清（1：50～1：100）滴上，室温30～60min，以饱和固定剂中的游离醛基占据非特异性结合部位。

（5）PBS漂洗3min，洗1次（有人主张不洗）。

（6）滤纸吸干，孵育于第一抗体血清滴上，先室温预孵1h，再置于4℃24～36h。

（7）PBS漂洗3min，3次。

（8）PBS（内含1%的牛血清白蛋白）pH8.2中，5min，此步为胶体金结合作准备。

（9）胶体金标记抗体液1：30～1：100，淡红色为适宜稀释液，室温孵育10min至1h。

（10）双蒸水洗3min，3次。

如作双重染色，则应将镍网翻过来，用另一类抗体血清，重复上述步骤（2）～（10）。

（11）5%醋酸铀（双蒸水配制）染5min，然后用双蒸水洗。

（12）枸橼酸铀（或醋酸铅）染色5min，双蒸水洗净。

（13）电镜观察。