中医书籍-->西医备考-->实用免疫细胞与核酸-->第十五章 自身抗体的免疫组织化学检测方法和应用-->第二节 在研究和诊断自身免疫性疾病中的应用-->四、抗组蛋白抗体的检测方法

四、抗组蛋白抗体的检测方法

大字体 | 正常字体 | 简体 | 正體
分享到:

免责声明:本文来自互联网,文章内容仅供参考!

1.组蛋白的提取方法取大白鼠肝40g加入160ml0.01mol/l Ph7.4 Tris HCl缓冲液,制成匀浆后进行浓度梯度离心(27000rpm×60min),沉淀物中加入蒸馏水90ml,再以超声粉碎仪将细胞打碎,离心(3000rpm×15min)取上清液,再加入一定量的1mol/l 硫酸,使硫酸的最终浓度为0.2mol/L,混匀后,离心(3000rpm×15min),取上清液,加入4~5倍体积的无水乙醇,置于-20℃冰箱3天后,离心(3000rpm×15min)以乙醚洗涤沉淀,真空干燥,储存于-20℃冰箱中备用。

2.酸处理的鼠肾底物  鼠肾冰冻切片(厚度4μm),以丙酮固定后吹干,密封,在-20℃冰箱中储存备用。用前再于0.1mol/L盐酸中浸泡30min,然后再置于0.01mol/l pH7.4PBS中浸泡2次。

3.组蛋白重建的鼠肾底物在上述酸处理的鼠肾底物上加入30μl乙制备好的组蛋白,稀释浓度为25μl/ml,在室温中湿盒内孵育30min后,以0.01mol/l p7.4PBS浸2次。

4.检测方法用组蛋白重建的鼠肾底物,做间接免疫荧光测定。

5.结果1960年Kunkle首先在SLE中发现抗组蛋白抗体(Antihistone antibody ,AHA),是诊断药物性SLE的一项较好的指标。在活动期SLE中AHA可达90%。

注意:本文来自互联网,并由中医村中医网负责收集整理!转载请注明出处!

评论: