免疫细胞化学中应用的缓冲液种类较多，即使是同种缓冲液，其浓度、pH、离子强度等也常常不同。在此介绍几种最常用的缓冲液的配制。

1．0.2mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液（PhosphateBuffer, PB）

试剂： NaH2PO4·2H2O

Na2HPO4·12H2O

配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。

（1）0.2mol/L的 Na2HPO4；称取Na2HPO4.12H2o 31.2g(或 NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。

（2）0.2mol/L的 Na2HPO4：称取NaHPO4.·12H2o 71.632g（或 Na2HPO4·7H2O 53.6g或 Na2HPO4·2H2o 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。

（3）0.2mol/LpH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4·12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。

2．0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水（PhosphateBuffered Saline, PBS）

试剂：0.2mol/L PB　50ml

NaCl 　8.5～9g(约0.15mol/L)

重蒸水 至1000ml

配制方法：称取NaCl 8.5～9g及0.2mol/L的PB 50ml，加入1000ml的容量瓶中，最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀即可。若拟配制0.02mol/L的PBS，则PB量加倍即可，依此类推。

PB和PBS是免疫细胞化学实验中最为常用的缓冲液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等，其pH应在7.25～7.35之间，否则需要调整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情况下，0.2mol/l PB的pH值稍高些，稀释成0.01mol/L的PBS时，常可达到要求的pH值，若需调整pH，通常也是调PB的pH。

3．Karasson –Schwlt’s磷酸盐缓冲液

试剂： NaH2PO4·H2O3.31g

Na2HPO4·7H2O　33.77g

重蒸水 至1000ml

配制方法：同前

该缓冲液主要用于配制Zamboni’s固定液。

4．0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl缓冲液。

试剂：Tris(三羟甲基氨基甲烷)60.57g

1N HCl　约420ml

重蒸水 至1000ml

配制方法：先以少量重蒸水（300～500ml）溶解Tris,加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6，最后加重蒸水至1000ml。此液为储备液，于4℃冰箱中保存。免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05mol/L，用时取储备液稀释10倍即可。

该液主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液。

5．Tris缓冲生理盐水（TrisBuffered,Saline,TBS）

试剂：0.5mol/L Tris-HCl缓冲液　100ml

NaCl　3.5～9g(0.15mol/L)

重蒸水至1000ml

配制：先以重蒸水少许溶解NaCl,再加Tris-HCl缓冲液，最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀使Tris终浓度为0.05mol/L。

TBS主要用于漂洗标本，常用于免疫酶技术中。

6．Tris-TBS(PBS)

试剂：Triton X-100　10ml(1%)或3ml(0.3%)

0.5mol/L Tris缓冲液（pH7.6）1000ml(50ml)或(0.2mol/L的PB)

NaCl8.5～9g

重蒸水　至1000ml

配制方法：先以重蒸水少许溶解NaCl后，加入Triton X-100及Tris缓冲液或（PB），最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀。

该液常用浓度为1%及0.3%，前者主要用于漂洗标本，后者主要用于稀释血清。

7．0.1mol/L（pH7.4）二甲胂酸缓冲液

试剂：0.2mol/L二甲胂酸钠500ml

0.1N HCl28ml

蒸馏水　至1000ml

配制方法：先称取二甲胂酸钠（MW：214）42.8g,加蒸馏水至1000ml，使0.2mol/L的二甲胂酸钠溶液；再取HCl 1.7ml加蒸馏水至1000ml ,配成0.1N，最后 取0.2mol/L二甲胂酸钠溶液500ml及0.1n HCl 28ml混合，加蒸馏水至1000ml，即为0.1mol/L的二甲胂酸钠缓冲液。

8．几种常用的不同pH值缓冲液的配制表

（1）0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.0）

(2)0.05mol/L Tris-HCl缓冲液（pH7.19～9.10）

(3)0.2mol/L醋酸盐缓冲液（pH3.6～5.6）

(4)0.1mol/L二甲胂酸钠缓冲液（pH5.0～7.4）

注：HCI可由NCO3代替，配制成二甲胂酸钠-HNO3缓冲液。

（5）0.2mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2～10.7）