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九、原位杂交信号显示
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目前应用原位杂交方法中,信号的显示主要有放射自显影,酶底物及免疫金银等方法,在此归纳有关的主要试剂。
1.A-B显影液
称取上述试剂,按配方分别溶于50ml ddH2O中,于显影前,在室温将两者(A液及B液)按1:1混合,稍加摇动促进混合,即可将贴有切片标本的切片放入显影液,于室温避光(可暗室)反应5~15min。显影时间和温度相关,需自己根据情况摸索。终止反应只需将显影液倒出,自来水冲洗即可。倒出的AB显影液可暂时不扔,光镜下观察,若明显显影不够,还可重新或继续显影。AB显影液要求临用前配制,在显影时才将AB二液混合。否则,A液过久会产生黄色沉淀,增加背景。
AB液用于免疫金银法中,使金标记颗粒信号放大,形成棕黑色沉淀。
2.DAB-H2O显色液
配制方法见附录一。
该液用于标本被标记上辣根过氧化物酶(HRP)的方法。产物为棕黄色。
3.NBT-BCIP显色液
配制方法,详见附录一。
该液用于有碱性磷酸酶标记物的方法中。产物为紫蓝色。
4.Kodak D-19显影液
配制:先将500ml水中加温50℃,按上述配方顺序加药,同时充分搅拌,每加一种药完全溶解后,再加另一种药品,否则,所配的显影液易产生混浊而效果差,最后补足水至1000ml充分混合,室温或4℃避光保存。最好包上纸。
该液用于放射自显影时的显影。
5.Kodak F-5定影液(酸性坚膜定影液)
※:28%醋酸为3份冰醋酸和8份水混合液。
配制:同Kodak D-19显影液。
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