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四、ApoE基因型的检测
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采用聚合酶链反应(PCR)限制性片段长度多态性(RFLP),即PCR-RFLP技术从基因水平检测ApoE基因多态性(基因型),操作简便、快速准确。
1.仪器与试剂
(1)仪器:电泳仪、基因扩增仪;
(2)试剂:Taq DNA聚合酶、dNTPs、DNA参考物(pBR322DNA/HacⅢmarkers)、HhaⅠ,其余试剂均为分析纯。
2.实验方法
(1)引物的设计与合成:引物参考文献设计,由Ranson Hill Bio Ssience Inc合成。序列为P1:5’-AACAACTGACCCCGGTGGCG-3’;P2:5’-ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC-3’。特异性扩增ApoE基因第4外显子区含编码112位与158位氨基酸的基因序列(如图19-5)。产物片段292bp。
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